Endotoxin mérést befolyásoló tényezők

Az esetleges interferencia kiváltó okai igen változatosak, mechanizmusának valódi természetét esetenként nehéz meghatározni. Hígítatlan termék tesztelésekor, rendszerint több típusú interferencia jelenlétére számíthatunk. Szerencsére a reakciósebesség csökkenéssel vagy növekedéssel kapcsolatos problémák 97 %-át egyszerű előkezeléssel (többnyire hígítással) meg lehet oldani, mivel a gátlás rendszerint koncentrációfüggő. Az FDA LAL-tesztelési irányelve előírja az interferencia vizsgálatát, mivel CSE használatakor számottevő különbség léphet fel a pozitív vizes kontroll és a pozitív termékkontroll között (a különbség a kvantitatív módszerhez viszonyítva jelentős, ha a pozitív termékkontroll 25 %-nál nagyobb mértékben tér el a vizes standardtól).

A szakirodalomban több megoldást is ajánlanak az interferencia kiküszöbölésére (hígítás, hőkezelés, dialízis, precipitáció, felületaktív anyagok, pufferek, MgCl₂ adagolása), azonban az interferencia kiküszöbölésének legészszerűbb módja az adott szituációban a mechanizmus természetének felderítése és a specifikus problémát semlegesítő eljárás kidolgozása. Az interferencia kiküszöbölése során vigyáznunk kell arra, hogy a mintában jelenlévő endotoxin mennyisége ne változzon és hígítás esetén a kimutatási határon belül maradjon. .

A LAL meghatározás aranyszabályaként, általános irányelvként elfogadhatjuk, hogy a minták előkezelése során arra kell törekedni, hogy a kezelés után a minta úgy viselkedjen, mint az endotoxin a vízben.

Optimális mérési körülmények

• A mérés során használt összes anyagnak endotoxin mentesnek kell lennie
  (az üvegeszközök hőkezeléssel történő pirogénmentesítése 30 percig 250 °C-on)
• Egyszer használatos eszközök használata javasolt
• Aszeptikus mérési körülmények
• Semleges pH (pH 6.0-7.5)
• Kétértékű kationok jelenléte (Ca, Mg)
• Diszpergált endotoxin
• 37° C

A mérést zavaró körülmények

• Az optimálistól eltérő pH értékek
• Az endotoxin adszorbciója vagy aggregációja
• Nem megfelelő kation koncentráció
• Enzim vagy fehérje megváltozása
• Nem specifikus (nem endotoxin okozta) LAL-aktiváció
• Fém-ionok jelenléte
• EDTA jelenléte
• Fenol jelenléte
• Na-biszulfit jelenléte
• Metil-paraben jelenléte
• Etanol jelenléte